一、服務(wù)簡介：
CRISPR/Cas9 是一種能夠?qū)蚪M的特定位點進行精確編輯的技術(shù)。其原理是核酸內(nèi)切酶Cas9蛋白通過導向性RNA（guide RNA, gRNA）識別特定基因組位點并對雙鏈DNA進行切割，細胞隨之利用非同源末端連接(Non homologous End Joining，NHEJ）或者同源重組（Homologous Recombination, HR）方式對切割位點進行修復(fù)，實現(xiàn)DNA水平基因敲除或精確編輯。
二、服務(wù)內(nèi)容：
1. CRISPR基因敲除：
利用CRISPR / Cas9 進行單基因敲除。
目前研究最透徹、應(yīng)用最廣泛的II 型-CRISPR/Cas9 系統(tǒng)由兩部分組成：
(1). 單鏈的guide RNA（single-guide RNA，sgRNA）
(2). 有核酸內(nèi)切酶活性的Cas9 蛋白：
CRISPR/Cas9 系統(tǒng)利用sgRNA 來識別靶基因DNA，并引導Cas9 核酸內(nèi)切酶剪切DNA（圖1）。當基因組發(fā)生雙鏈DNA 斷裂后，細胞通過非同源性末端接合(Non-homologous end joining, NHEJ) 將斷裂接合，在此過程中，將隨機引入N 個堿基的缺失或增加，若N 非3 的倍數(shù)，則目的基因發(fā)生移碼突變，實現(xiàn)基因敲除。
;圖1 CRISPR / Cas9 KO 原理
2. CRISPR過表達：
利用CRISPR / Cas9 進行單基因過表達 。
通過修飾CRISPR/Cas9 系統(tǒng)中的一些元件，形成一種蛋白復(fù)合物-協(xié)同激活介質(zhì)（SAM），可實現(xiàn)對多數(shù)細胞內(nèi)源基因的特異性激活。該系統(tǒng)靈活方便，為研究基因功能提供了極為便利的工具。
CRISPR-SAM 系統(tǒng)由三部分組成：
1. 失去核酸酶活性的dCas9（deactivated Cas9）-VP64 融合蛋白。
2. 含2 個MS2 RNA adapter 的sgRNA。
3. MS2-P65-HSF1 激活輔助蛋白
CRISPR-SAM 系統(tǒng)中的MS2-P65-HSF1 激活輔助蛋白就是SAM，全稱為SynergisticActivation Mediator( 協(xié)同激活調(diào)節(jié)器)，這也就是CRISPR-SAM 的命名由來。CRISPR-SAM 借助dCas9-sgRNA 的識別能力，通過MS2 與MS2adapter 的結(jié)合作用，將P65/HSF1/VP64 等（均為轉(zhuǎn)錄激活因子）拉攏到目的基因啟動子區(qū)域，成為一種強效的選擇性基因活化劑，從而增強基因的轉(zhuǎn)錄表達。
三、聯(lián)系方式：
電話：400-681-8582
