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實(shí)驗(yàn)服務(wù)

EXPERIMENTAL SERVICE

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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

分類：分子實(shí)驗(yàn)   發(fā)布時(shí)間    閱讀： 466
1.服務(wù)簡介：
熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素（luciferin）為底物來檢測(cè)螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase） 活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成 oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會(huì)發(fā)出生物熒光（bioluminescence），可通過熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。
2.服務(wù)內(nèi)容：
(1). 驗(yàn)證miR同mRNA靶向互作。將待測(cè)mRNA的預(yù)測(cè)靶向序列插入報(bào)告基因載體，再共轉(zhuǎn)入該miR mimics，如果螢光素酶活性下降，則提示為其靶序列。
(2). 驗(yàn)證miR同lncRNA靶向互作。將候選的lncRNA預(yù)測(cè)靶向序列插入報(bào)告基因載體中F-Luc的3’UTR區(qū)域，檢測(cè)螢光素活性。
(3). 啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析。將啟動(dòng)子區(qū)域序列（通常2k左右）進(jìn)行分段截短，或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變，再分別構(gòu)建入luciferase報(bào)告載體中替換啟動(dòng)子序列，檢測(cè)其啟動(dòng)子活性。
(4). 驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用。將該序列（通常為啟動(dòng)子區(qū)域）插入報(bào)告基因載體，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞中共轉(zhuǎn)過表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子，可分析轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)是否提高螢光素酶活性。
3.可供選擇的載體：

編號(hào)
 可提供的載體名稱
1 pGL4.17[luc2/Neo] 信號(hào)通路報(bào)告載體
2 pLuc2-hRluc(pGL4.10-hRluc) 信號(hào)通路報(bào)告載體 雙熒光素酶luc2+hRluc
3 pGL3-hRluc 雙熒光素酶報(bào)告基因載體同時(shí)含有螢火蟲熒光luc+和海腎熒光Rluc
4 pGL3-basic 熒光素酶報(bào)告基因載體（螢火蟲熒光）
5 pmirGLO，pMir-Glo circRNA 3'UTR miRNA功能研究載體，熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)質(zhì)粒

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