CCK-8細胞增殖檢測試劑說明書
概述： CCK-8（Cell Count Kit-8）是一種利用WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）快速檢測細胞增殖或毒性試驗的方法。WST-8是一種類似MTT的四唑鹽，在電子載體的存在下，被活細胞內(nèi)的脫氫酶還原生成水溶性的橙黃色Formazan（甲臜），通過比色法檢測甲臜生成量可以反映試驗中活細胞的數(shù)量。
操作方法：
細胞毒性檢測
1. 接種細胞：接種對數(shù)期的細胞至96孔板，接種數(shù)量1~5×103個/孔，每孔100 μl，每組設置3~5個復孔，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱；
2. 樣品處理：待細胞貼壁后，加入不同濃度的樣品處理細胞，然后置于培養(yǎng)箱中孵育一定的時間（如：24 h、48 h、72 h）；
3. CCK-8孵育：每孔加入10 μl的CCK-8試劑，輕輕混勻，并將培養(yǎng)板置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育1~4 h；（可進行預實驗確定孵育時間）；
4. 上機檢測：將孵育后的細胞培養(yǎng)板置于酶標儀上，在450 nm處檢測其吸光值；
儲存條件: 4℃保存，半年有效；-20℃保存，兩年有效
2. 以Hela細胞為例，細胞按1.25×103 ~ 20×103個/孔的密度梯度接種至96孔板中，培養(yǎng)4 h后，待細胞完全貼壁，每孔加入10 μl的CCK-8試劑，輕輕混勻，置于培養(yǎng)箱中孵育1 h后，在450 nm處檢測其吸光值，并制作標準曲線。
注意事項：
1. 使用前先將低溫保存的試劑在室溫條件下放置20-30 min。
2. 接種對數(shù)期生長的細胞，注意使細胞分散均勻，確保每個復孔中的細胞數(shù)量一致，減少誤差。
3. 為了達到最佳的實驗效果，建議先進行預實驗，確定最佳的細胞接種密度及CCK-8試劑孵育時間；以貼壁細胞為例，接種密度約1~5×103個/孔；孵育時間為1~4 h，多數(shù)細胞孵育約30 min即可觀察到明顯的顏色變化。
4. 設置空白對照，在無細胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8檢測，去除本底對吸光值的干擾。
5. 如果OD值太高，建議降低細胞接種密度或減少CCK-8試劑孵育時間。
本公司所有產(chǎn)品僅供科研使用！
